セルラーゼ活性測定

試薬

• 0.05M クエン酸バッファー(pH 4.8)
• セルロース粉末
• 1mg/ml グルコース
• DNS溶液

手順

サンプルを滅菌乳鉢内で磨砕する。その後、bufferを加えてサンプルと混和し粗酵素液とする。

滅菌試験管に下記表に従って試薬を入れる。セルロースは水に不溶なので計量して各試験官に移す。

	buffer(mL)	セルロース(g)	酵素液(mL)	1mg/ml グルコース(mL)
ブランク	1.5	-	-	-
酵素コントロール	1.50	0.01	-	-
検量1	1.45	0.01	-	0.05
検量2	1.40	0.01	-	0.10
検量3	1.35	0.01	-	0.15
検量4	1.30	0.01	-	0.20
基質コントロール	1.00	-	0.5	-
反応	1.00	0.01	0.5	-

50℃、1時間反応させる。

反応後各溶液にDNS液を2倍量(3 mL)加える。

試験管ごと5分間煮沸する。（変色）

加熱後、各溶液に等量（3 mL)の蒸留水を加えて希釈する。

希釈後、分光光度計を用いてサンプルの吸光度[540 nm]を測定する。

酵素コントロールと検量1～4の測定値を基に溶液中グルコースの検量線を作成できる。そして「反応」処理区の測定値から基質コントロールの測定値を引いた値から、検量線を参考に酵素反応によって生じたグルコース量を決定できる。