還元等の定量

ジニトロサリチル酸を用いたグルコース（還元糖）の定量

還元糖の1種であるグルコース量をジニトロサリチル酸を用いて呈色・定量する

また、グルコースを定量することでセルラーゼ活性測定に活用できる

[試薬]

[調整]

1. 10% NaOH溶液　35 mL作成する

2. 10% NaOH溶液(1)を希釈して4.5% NaOH溶液　45 mL作成する

3. 1%(W/V)DNS溶液　132 mL作成する(*DNS:1.32 g＋水:132 mL)

4. 2と3の溶液　全量混合

5. ロッシェル塩 38.25 gを(4)に加えて溶かす

正常：紅茶みたいな色になる
DNSsippai

失敗：NaOHを入れていないと不透明なバナナ黄色になる

6. フェノール 1.5 gを10％ NaOH溶液（１）3.3 mLに溶かす

7. 6の溶液に水を加えて15 mLにメスアップ

8. 炭酸ナトリウム 1.035 gを7の溶液 10.35 mLに溶かす（無色透明）

9. 5と8の溶液を全量混合　終

変わらず紅茶色

[検証]

試験管5本に作成したDNS溶液800 µLを移した。それぞれのDNS溶液に1mg/mlグルコース0、50、100、150、200 µLと水200、150、100、50、0 µL加えた。(total 1 mL)

湯を沸かし、試験管に蓋をして溶液を5分間煮沸して反応させた。(黄色-->黒褐色)

加熱前

加熱後

「DNSのグルコースに伴う変色：各画像左からグルコース溶液0、50、100、150、200µL含む」

反応後、試験管ごと溶液を冷却して水を1 mLを加えて混和した。(total 2 mL)

反応液の吸光度ABS[540nm]を測定した。（結果データは下のグラフとして示す。）

＞結果：反応液のグルコース濃度が0.25µg/mL高まるにつれて吸光度の値はおよそ[0.28]上昇した。この結果から800µLのDNS溶液は0～1㎎のグルコースを比例的に呈色可能であり検量線を作成できた。

＞＞検量線：Y = 1.4396x